что такое fish исследование в онкологии
Что такое fish исследование в онкологии
Флуоресцентная гибридизация in situ.
Какой биоматериал можно использовать для исследования?
Образец ткани, образец ткани в парафиновом блоке.
Как правильно подготовиться к исследованию?
Специальной подготовки не требуется.
Общая информация об исследовании
HER2-положительный статус опухоли выявляется у 25-30 % всех пациентов с РМЖ (около 15 тыс. новых случаев в год). В России около 90 000 тыс. женщин с РМЖ с положительным HER2-статусом. Из них выявлено и состоит на учете только 3 425 пациенток.
Флуоресцентная гибридизация in situ (FISH, от англ. fluorescencein—situ hybridization) – это один из самых современных методов диагностики хромосомных аномалий. Он основан на использовании ДНК-проб, меченных флуоресцентной меткой. ДНК-пробы представляют собой специально синтезированные фрагменты ДНК, последовательность которых комплементарна последовательности ДНК исследуемых аберрантных хромосом. Таким образом, ДНК-пробы различаются по составу: для определения разных хромосомных аномалий используются разные, специфические ДНК-пробы. ДНК-пробы также различаются по размеру: одни могут быть направлены к целой хромосоме, другие – к конкретному локусу.
В ходе процесса гибридизации при наличии в исследуемом образце аберрантных хромосом происходит их связывание с ДНК-пробой, которое при исследовании с помощью флуоресцентного микроскопа определяется как флуоресцентный сигнал (положительный результат FISH-теста). При отсутствии аберрантных хромосом несвязанные ДНК-пробы в ходе реакции отмываются, что при исследовании с помощью флуоресцентного микроскопа определяется как отсутствие флуоресцентного сигнала (отрицательный результат FISH-теста). Метод позволяет оценить не только наличие флуоресцентного сигнала, но и его интенсивность и локализацию. Таким образом, FISH-тест – это не только качественный, но и количественный метод.
Для чего используется исследование?
Когда назначается исследование?
Что означают результаты?
Результат оценивается как соотношение числа копий гена HER2 к числу копий 17 хромосомы.
FISH-положительным считается образец, в котором соотношение HER2:CEP17 больше или равно 2.0
25 Иммуногистохимическое исследование клинического материала (с использованием 1 антитела)
15 Иммуногистохимическое исследование клинического материала (с использованием 4 и более антител)
25 Определение HER2 статуса опухоли методом СISH
Кто назначает исследование?
Онколог, педиатр, акушер-гинеколог, врач-генетик.
Фиш анализ при раке молочной железы
13 марта 2020 г. 9:07
Пациенты с раком имеют подавленную иммунную систему и более восприимчивы к инфекциям.
12 марта 2020 г. 8:26
Исследователи представили структуру и механизм белков, которые экспрессируются при различных формах рака и связаны с плохим прогнозом пациента.
9 марта 2020 г. 12:07
В низких дозах тетродотоксин заменяет опиоиды для облегчения боли, связанной с раком.
5 марта 2020 г. 14:24
Новый метод картирования сил, которые кластеры клеток оказывают на микроокружение, может помочь в изучении развития тканей и метастазирования рака.
Пройти фиш анализ при раке молочной железы предлагает клиника Ассута. Флуоресцентная гибридизация, иначе именуемая ФИШ (FISH) – генетический тест, дающий представление о природе опухоли. Изучая новообразование методом ФИШ, врач узнает, является ли рак положительным или отрицательным по отношению к гену HER2. Присутствующие в клетках организма копии гена стимулируют рост атипичных раковых клеток. После пройденной диагностики, врач сможет составить наиболее детальный план лечения.
Современный лабораторный комплекс клиники Ассута проводит ФИШ (FISH) анализ для оценки раковых патологий груди:
Позвоните, чтобы узнать, как оформиться на лечение. Восстановите здоровье в крупнейшем госпитале на территории Ближнего Востока.
Фиш тест при раке молочной железы – механизм развития онкологии
Рецепторы гена HER2 отвечают за выработку HER2 белков, которые являются рецепторами, присутствующими в злокачественных клетках. При активизации рецепторов в раковые клетки поступает сигнал о необходимости деления и размножения. В норме HER 2 рецепторы регулируют рост клеток молочной железы, поддерживая баланс здоровья в тканях.
Однако доказано, что ген HER 2 избыточно вырабатывается в одном из пяти случаев онкологии. Это означает, что вместо одной копии гена у человека присутствует ген от каждого родителя. Это объясняет избыток HER рецепторов в организме, вызывая бесконтрольный и агрессивный рост опухоли.
Пройти фиш анализ при раке молочной железы необходимо для того, чтобы узнать, насколько причина развития патологии в организме связана с аномальным продуцированием рецепторов. Вы должны знать, является ли тип рака HER2 положительным или отрицательным. Существуют методы лечения, специально разработанные для рецепторов HER 2 положительного рака груди. Анализ позволяет не терять время на поиск результативных методов воздействия.
Когда проводится fish реакция при раке молочной железы, врач использует профильные окрашивающие вещества для визуализации хромосомных нарушений. Нанесенный на изучаемые ткани раствор дает возможность увидеть аномалии. Преимуществом ФИШ анализа является то, что с его помощью можно обнаружить генетические отклонения, которые слишком малы для изучения под микроскопом альтернативными методами.
Виды анализов
Для выяснения положительной или отрицательной природы HER2 врачи клиники Ассута направляют пациента на тестирование в собственную лабораторию. Различают два типа тестов:
Очень редко fish анализ бывает неопределенным или двусмысленным. При таком стечении обстоятельств требуется еще одна биопсия и новая фиш реакция при раке молочной железы для подтверждения диагноза.
Как проходит фиш тест при раке молочной железы – руководство для пациента
Для грамотной диагностики статуса HER 2 врач проводит биопсию, в процессе которой изымает образцы измененных патологией тканей. В большинстве случаев используется местная анестезия, чтобы нейтрализовать дискомфорт. В дальнейшем извлеченная ткань направляется на исследование в лабораторию, где с ней работает патолог. Очень важно, чтобы лаборатория являлась авторитетной в медицинской среде, потому что от правильности постановки диагноза напрямую зависит жизнь пациента. Доказано, что fish тест при раке молочной железы – безопасная процедура. Он не требует много времени, отдельных процедур кроме биопсии и дополнительной травматизации тканей.
Почему изначально проводится IHC тестирование? Это проще и доступнее. Однако, если анализы неубедительны, тестирование ФИШ обязательно к проведению. В редких случаях возможна повторная биопсия с забором проб. Но это, действительно, происходит крайне редко. Если анализ fish при раке молочной железы показал положительный HER2 результат, вам будет назначено эффективное лечение HER2 положительного рака. Несмотря на то, что это агрессивная форма патологии, перспективы для людей с таким диагнозом в последние годы значительно улучшились. Это связано с новыми и эффективными методами лечения рака груди в Израиле, нацеленными на HER 2 рецепторы.
Что такое fish исследование в онкологии
Флуоресцентная гибридизация in situ (FISH) – новейший молекулярно-цитогенетический метод исследования, в процессе которого детектируется наличие и локализация специфических ДНК-последовательностей на хромосомах. В данном исследовании, основанном на методе FISH, выявляются генетические аберрации, характерные для следующих онкогематологических заболеваний: хронический лимфолейкоз, MALT-лимфома и лимфома Беркитта.
Флуоресцентная гибридизация in situ, молекулярная диагностика онкогематологических заболеваний, хронический лимфолейкоз, лимфома Беркитта, лимфопролиферативные заболевания.
Analysis of all specific aberrations on paraffin slides (FISH Histology, quantitative), Lymphoproliferative disorders, Chronic lymphocytic leukemia (CLL), MALT lymphoma, Burkitt’s lymphoma.
Флуоресцентная гибридизация in situ (FISH)
Какой биоматериал можно использовать для исследования?
Образец ткани в парафиновом блоке
Как правильно подготовиться к исследованию?
Специальной подготовки не требуется. Для исследования используется уже предварительно подготовленный биологический материал (парафиновый блок с образцом биоматериала).
Преимущества исследования
Общая информация об исследовании
Анализ с помощью флюоресцентной in situ гибридизации (fluorescence in situ hybridization, FISH) – молекулярно‐цитогенетический метод для идентификации генетических аберраций (отклонений от нормы). Изначально данный метод использовался как исследовательский для выявления наличия или отсутствия специфической ДНК последовательности в хромосомах, но благодаря прогностической и предсказательной ценности был внедрен в клиническую практику.
Метод основан на использовании флуоресцентно меченых ДНК-зондов, которые представляют собой искусственно синтезированные фрагменты ДНК (олигонуклеотиды), последовательность которых комплементарна последовательности ДНК исследуемых аберрантных хромосом. ДНК-зонды различаются по специфичности: для каждой хромосомной аномалии используются свои ДНК-зонды. Также зонды различаются по размеру: одни могут быть направлены к целой хромосоме, другие – к конкретному локусу (фрагменту хромосомы или гена).
После специальной процедуры – денатурации – молекула ДНК приобретает вид одноцепочечной нити. ДНК-зонд гибридизуется (связывается) с комплементарной ему нуклеотидной последовательностью и может быть обнаружен при помощи флуоресцентного микроскопа. Данное состояние интерпретируется как положительный результат FISH-теста. При отсутствии аберрантных хромосом несвязанные ДНК-зонды в ходе реакции «отмываются», что при исследовании с помощью флуоресцентного микроскопа определяется как отсутствие флуоресцентного сигнала (отрицательный результат FISH-теста). Метод позволяет оценить не только наличие флуоресцентного сигнала, но и его интенсивность и локализацию. Таким образом, FISH-тест – это еще и количественный метод.
FISH имеет широкие возможности в клинической онкологии для обнаружения хромосомных аномалий в опухолевых клетках. Метод позволяет исследовать генетический состав клетки, как во время митоза, так и в интерфазе. FISH имеет высокую чувствительность – позволяет обнаружить индивидуальные гены, кроме того, в одном препарате могут быть использованы несколько зондов с различными красителями.
FISH-анализ широко применяется при лимфопролиферативных заболеваниях, являясь в ряде случаев определяющим фактором для подтверждения диагноза.
Хронический лимфолейкоз (ХЛЛ) – самый частый вид лейкозов у взрослых. Характеризуется пролиферацией и увеличением в периферической крови количества морфологически зрелых лимфоцитов на фоне лимфоцитарной инфильтрации костного мозга, лимфатических узлов, селезенки и других органов. Клеточный субстрат хронического лимфолейкоза представлен чаще В-популяцией (около 30 %) и значительно реже — Т-лимфоцитами (около 70 %). В-лимфоциты при ХЛЛ не развиваются до плазматических клеток вследствие изменений в клеточном геноме. Это ведет к резкому уменьшению выработки иммуноглобулинов, к которым относятся все антитела. Заболевание чаще возникает у лиц старше 65 лет, у 10-15 % больных в возрасте чуть старше 50 лет. До 40 лет хронический лимфолейкоз возникает крайне редко. Мужчины болеют примерно в 2 раза чаще, чем женщины.
Симптомы обычно развиваются медленно, чаще выявляется случайно при обследовании по поводу других причин. При ХЛЛ наблюдаются следующие симптомы: кровоподтеки (если тромбоциты снижены), увеличение лимфатических узлов, печени или селезенка, чрезмерное потоотделение, ночная потливость, усталость, лихорадка, реинфекции, потеря аппетита, потеря веса.
Лимфома маргинальной зоны, ассоциированная со слизистыми (MALT, mucosa-associated lymphoid tissue) является третьим по распространенности подтипом неходжкинской лимфомы и составляет
Процесс может возникать в любых экстранодальных зонах (вне лимфатических узлов), но большую часть (85 % всех MALT-лимфом) составляют лимфомы желудка. Далее по частоте поражения следуют околоушные и слюнные железы (18-26 %), легкие (около 14 %), придаточный аппарат глаза (12 %), кожа (11 %), голова и шея (11 %), щитовидная (4-6 %) и молочная железа (2-3 %). Достаточно редко поражаются лимфатические узлы, селезенка или печень. Рецидивы MALT-лимфом часто случаются в других MALT-ассоциированных областях.
Показано, что приблизительно 90 % случаев МАLT-лимфом желудка связано с инфицированием H. рylori. У 70–80 % больных под влиянием эрадикационной (антихеликобактерной) терапии наблюдается регрессия MALT- лимфомы. Дифференциальная диагностику проводят с H. pylori-ассоциированным гастритом.
Симптомы варьируются в зависимости от типа: лихорадка, потеря веса, вздутие живота, искажение лицевых костей, ночная потливость, кишечная непроходимость, увеличенная щитовидная железа, увеличенные миндалины.
Для чего используется исследование?
Когда назначается исследование?
Что означают результаты?
Отсутствие аберрантных хромосом в исследуемом образце
Хромосомные аномалии, характерные для лимфопролиферативных заболеваний:
Прогностически значимыми являются следующие аберрации: делеция длинного плеча хромосомы 13 (13q-), трисомия 12 хромосомы, делеция длинного плеча хромосомы 11 (11q-). Делеция короткого плеча хромосомы 17 (17p-) является главным цитогенетическим маркером, непосредственно влияющим на терапевтическую тактику. Рекомендуется проводить скрининг на делецию 17p у всех пациентов, имеющих показания к началу терапии и/или при неэффективности стандартной терапии, особенно пациентам моложе 55 лет, которым может быть проведена аллогенная трансплантация.
Второй наиболее частой транслокацией, идентифицированной с MALT-лимфомой, является t (14;18)(q32; q21).Приблизительно в 4 % MALT-лимфомы желудка и 8 % MALT-лимфомы легких выявляется t(1;14) (p22;q32).Характерным для MALT-лимфом является также нарушение нормальной активности важного супрессора опухоли — гена BCL10, что наблюдается при t(1;14)(p22;q32).
Важно отметить, что лимфомы MALT не несут транслокацию t (11; 14) (q13; q32), типичную для лимфомы мантийных клеток.
Выявление цитогенетического маркера лимфомы Беркитта – перестройки локуса гена C-MYC и транслокации t(8,14)(q24,q32) или ее вариантов t(2,8)(pl2,q24) или t(8,22)(q24,q11) позволяет диагностировать лимфому Беркитта. Перестройки гена C-MYC выявляется в 100 % случаев лимфомы Беркитта и является одним из главных диагностических критериев этого заболевания. В 80 % случаев встречается t(8;14)(q24;q32) перестройка локусов генов c-myc (8q24) и тяжелых цепей иммуноглобулинов Ig (14q32).
Изменения кариотипа являются независимым прогностическим фактором. При выявлении аберрации (13q-) можно прогнозировать стабильное состояние или медленное течение болезни и благоприятный ответ на терапию, если она является единственной (медиана выживаемости – 11 лет), в то время как остальные аберрации, в особенности (11q- ) и (17p- ) крайне неблагоприятны в прогностическом отношении (медианы выживаемости больных с трисомией 12 – 9,5 лет, ( 11q-) – 6,5 лет, (17p- ) – меньше 3 лет.
Кто назначает исследование?
1. Иммуногистохимические методы: Руководство / Ed. by George L. Kumar, Lars Rudbeck.: DAKO / Пер. с англ. под ред. Г.А.Франка и П.Г.Малькова. – М., 2011. – 224 с.
2. Wan TS, Ma ES. Molecular cytogenetics: an indispensable tool for cancer diagnosis. Chang Gung Med J. 2012. Mar-Apr: 35(2): 96-110. Review. PubMed PMID: 22537925.
5. М. Ж. Алексанян, Е. А. Асеева, А. И. Удовиченко, Е. В. Домрачева. Цитогенетические исследования в гематологии. Организационные аспекты. Гематология и трансфузиология, 2012, т. 57, № 4. С.23 – 27.
6. Хронический лимфолейкоз у взрослых. Клинические рекомендации. Национальное гематологическое общество Российское профессиональное общество онкогематологов. 2016г.
7. И.А. Крячок, Е.О. Ульянченко, Т.В. Кадникова, И.Б. Титоренко и др. MALT-лимфома: причины возникновения, патогенез, классификация, клиническая картина. Клиническая онкология, № 1 (25), 2017.
Определение HER2 статуса опухоли методом флуоресцентной гибридизации in situ (FISH) в Москве
Рак молочной железы — одно из самых распространенных онкологических заболеваний среди женщин. Данный лабораторный анализ направлен на определение особого гена и белка HER2 (HER2/Neu) с целью диагностировать тип рака молочной железы, оценить прогноз заболевания и сформировать лечебную тактику.
Приём и исследование биоматериала
Когда нужно сдавать анализ Определение HER2 статуса опухоли методом флуоресцентной гибридизации in situ (FISH)?
Подробное описание исследования
Рак молочной железы (РМЖ) — злокачественная опухоль, которая развивается из эпителиальных клеток молочной железы. Относится к наиболее часто встречающимся новообразованиям у женщин в России, диагностируется примерно в 20 % случаев от всех женских онкологических заболеваний.
Клинически РМЖ подразделяют на инвазивный и неинвазивный (in situ). Последний тип рака ограничен протоком или долькой молочной железы – его рост не затрагивает соседние ткани и сосуды. Инвазивный тип РМЖ разрастается из дольки или протока и может распространиться по всему организму через метастазы. Данный лабораторный тест является компонентом комплексной диагностики (чаще) инвазивного типа рака и выявляет статус гена HER2/Neu в гистологическом материале методом FISH.
Ген HER2/Neu (также известен как ERBB2) — участок молекулы ДНК, который локализуется на 17q21 (21-м сегменте длинного плеча 17-й хромосомы). Этот ген экспрессирует белок HER2/Neu, который является рецептором в эпителиальных клетках молочной железы. Через одноименный белок ген HER2/Neu контролирует ключевые физиологические процессы клеток эпителия молочной железы, способствует их росту, созреванию и делению. Благодаря этим свойствам белок HER2/Neu относят к группе факторов роста, а ген HER2/Neu — к протоонкогенам. В патологических условиях протоонкогены активируются и превращаются в онкогены, то есть в гены, которые способствуют опухолевому росту.
При развитии определенных генетических мутаций запускается процесс амплификации – число копий гена HER2/Neu кратно увеличивается, что приводит к избыточному образованию белка HER2/Neu. Эпителиальная клетка молочной железы, где произошла такая мутация, начинает бесконтрольно размножаться и впоследствии превращается в опухоль, которую принято обозначать как HER2-позитивную (положительную).
HER2-позитивный рак молочной железы имеет более худшие прогностические значения, чем HER2-негативные РМЖ. Это связано с более агрессивным ростом, более высокой частотой метастазирования и худшими показателями выживаемости. Тем не менее для пациентов с данным типом рака разработаны специальные методы лечения — антиклональные антитела с противоопухолевым действием против HER2-рецепторов (трастузумаб, пертузумаб и другие).
Определение HER2-позитивных РМЖ основано на двух методах исследования — иммуногистохимическом (ИГХ) и методе FISH. Первый выявляет количество (экспрессию) белков HER2/Neu при помощи специального окрашивания. Результат ИГХ может быть спорным (пограничным), в таких случаях его дополняют анализом FISH.
Анализ FISH или метод флуоресцентной гибридизации in situ выявляет не белки HER2/Neu, а наличие или отсутствие амплификации (увеличение копий) гена HER2/Neu в эпителиальных клетках молочной железы. Этот тест, по сравнению с иммуногистохимическим методом, является более точным и позволяет определить, данное новообразование относится к HER2-позитивному или HER2-негативному типу рака молочной железы.
На основании результатов анализа FISH лечащий врач может оценить прогноз онкологического заболевания и сформировать наиболее оптимальную тактику последующего лечения.
Анализ FISH при раке груди
Онкопатологии молочной железы представляют собой один из самых распространенных недугов. Потому к такой проблеме необходимо относиться максимально внимательно. Диагностические инструменты для определения данного типа рака за последние несколько лет серьезно изменились. Одной из новых методик становится флуоресцентная гибридизация in situ или FISH (фиш).
Для чего делается FISH-анализ?
Онкопатология МЖ может предусматривать разный гормональный статус, определяемый для формирования стратегии терапии. Существует несколько определенных маркеров онкологических новообразований. Так, рецептор HER2-neu отвечает за рост количества клеток методом деления.
При наличии онкологии МЖ в 25–30 % случаев активность этого гена увеличивается, он кодирует белок, называемый HER2-neu. Это активирует процессы бесконтрольного наращивания количества клеток, соответственно онкообразование быстро «разрастается», повышает неблагоприятный прогноз при терапии. Учитывая данный фактор, было изготовлен особое лекарство. Специализированное моноклональное антитело способно устранить активность данного белка, приостановить онкологические процессы. Но для такого воздействия препарата требуется точное выявление экспрессии белка. Это осуществляется посредством специализированного фиш-теста.
Когда проводится FISH-тест
Определение статуса указанного выше белка в клетках при онкологии МЖ возможно с использованием разных методик. Одним из самых простых становится иммуногистохимическое исследование. Но порой оно не позволяет получить точный ответ, результат. В результатах врач указывается:
0-1+ — результат негативный.
2+ — статус не определен.
3+ — статус позитивный.
Такое тестирование проводится при неопределенном результате изучения белка. Поскольку определить экспрессию гена не удается, невозможно сказать, подойдет ли такая стратегия терапии для пациента.
Сегодня нет методик FISH-тестирования, которые позволяли бы определять онкопатологии МЖ на ранних стадиях. Исследование назначается тем, у кого диагностировано или удалено новообразование, требуется подбор стратегии терапии.
Специфика реализации исследования
Для осуществления тестирования по методике FISH необходимы онкоклетки из исследуемого участка. Зачастую при назначении этого исследования пациентке уже провели нужные анализы. Иногда биопсия реализуется повторно.
После биопсии выполняется иммуногистохимическое исследование. Это более бюджетный, не менее точный инструмент по определению статуса гена при онкологии МЖ. Если данные указываются как 2+, то необходимо отправлять ткань на FISH-тестирование.
Повторно выполнять биопсию перед FISH-тестом не нужно, анализ реализуется посредством того же образца, который применялся в предыдущем исследовании. Специфика тестирования предполагает применение ДНК-зондов, связываемых с конкретными клеточными агентами. Для определения зонда применяются флуоресцентные пигменты.
При определении статуса белка значимыми являются 17 хромосома, где находится ген, кодирующий этот белок. Тестирование позволяет определить количество хромосом, копий гена в опухолевых клетках. Ткань проходит подготовительные мероприятия, размечается с помощью ДНК-зонда, затем специалист изучает срез ткани посредством специализированного оборудования.
Плюсы и минусы методики
Инновационный метод обеспечивает эффективное исследование HER2-статуса при онкопатологиях МЖ, подбор эффективной терапевтической стратегии. Необходимость в разработке данной методики возникла при создании специализированного медикамента Трастузумаб (Герцептин).Данные позволяют полагать, что при назначении данного препарата на начальных этапах онкопатологий груди возможно на 50 % снизить риски возникновения рецидива, смертность сокращается на 30 %.
Медикамент предусматривает направленное воздействие на клетки с активным HER2-neu. При других случаях и факторах развития онкообразований данный препарат не несет такой эффективности. Тестирование предусматривает быстрые сроки проведения, высокую чувствительность, а также специфичность. Зачастую тестирование занимает всего 2–3 дня.
Для реализации тестирования требуется специализированные технические устройства, которые достаточно дорого стоят, расходники. Потому пока провести данную процедуру можно только в крупных онкоклиниках. Кроме того, тестирование предусматривает достаточно высокую стоимость. Однако она полностью оправдывается эффективностью проведения тестов при онкологии молочной железы.
Современный FISH-тест представляет собой инновационный диагностический метод при онкопатологиях молочной железы, применяемый в специфичных случаях. Хотя он предполагает высокую точность, его не назначают всем пациентам, так как существуют другие методики исследований, но при наличии показаний такой тест позволит сформировать эффективную стратегию терапии, улучшить прогноз выживаемости пациента при онкологических патологиях.