что такое анатоксины их получение и применение
Анатоксины, их получение, титрование и практическое применение.
Анатоксины (anatoxinum от греч.— «an» — отрицание и toxo» — отравляю) представляют собой препараты, полученные из бактериальных экзотоксинов, полностью лишенные т ксических свойств, но сохранившие антигенные и иммуногенные свойства. Метод получения анатоксина предложил в 1923 году крупнейший французский ученый Рамон (G. Ramon).При приготовлении анатоксинов культуры бактерий — возбудителей токсинемических инфекций, продуцирующих экзотоксины, выращивают в жидких питательных средах (реакто-
рах большой емкости) для накопления токсина. Затем фильтруют через бактериальные фильтры для удаления микробных тел. К фильтрату добавляют 0,3—0,4 % —формалина и помещают в термостат при температуре 37°—40°С н а 3—4 недели до полного исчезновения токсических свойств. Полученный анатоксин проверяют на стерильность, безвредность и иммуногенность. Такие препараты получили название нативных анатоксинов, т. к. они содержат большое количество веществ питательной среды, которые являются балластными и могут
способствовать развитию нежелательных реакций организма при введении препарата. Нативные анатоксины необходимо вводить в больших дозах из-за их невысокой удельной активности. Поэтому в настоящее время применяются преимущественно очищенные анатоксины, для чего нативные анатоксины подвергают обработке различными физическими и химическими методами (ионнообменной хромотографии, кислотному осаждению и др.), чтобы освободить от всех балластных веществ и сконцентрировать препарат в меньшем объеме. Однако уменьшение размеров частиц анатоксина сделало необходимым адсорбировать препарат на адъютантах
Таким образом, применяющиеся анатоксины являются адсорбированными высокоочищенными концентрированными препаратам:’Специфическую активность или силу анатоксина определяют в реакции флоккуляции в так называемых единицах флоккуляции— (Lf) или по реакции связывания анатоксинов, выражающуюся в единицах связывания— (ЕС). Титрование анатоксинов в реакции флоккуляции (по методу Рамона) производят по стандартной флоккулирующей антитоксической сыворотке, в которой известно количество международных антитоксических единиц (ME, см. с. 23) в 1 мл. Одна антигенная единица анатоксина обозначается Limes flocculationis (Lf — порог флоккуляции), это то количество анатоксина, которое вступает в реакцию флоккуляции с одной единицей дифтерийного антитоксина. Определив дозу анатоксина, давшую инициальную (первичную) реакцию флоккуляции с одной антитоксической единицей сыворотки, рассчитывают количество Lf препарата в 1 мл. Антигенные свойства столбнячного анатоксина (и некоторых других) обозначают в единицах связывания (ЕС). Для определения ЕС необходимы:испытуемый препарат анатоксина, стандартная антитоксическая сыворотка (с содержанием 0,1 ME в 1 мл), опытная доза токсина (вытитрованная к 0,1 ME стандартной сыворотки), белые мыши.Реакцию связывания проводят следующим образом: в ряд пробирок с одинаковым объемом стандартной сыворотки добавляют различные разведения испытуемого анатоксина.Смесь для связывания выдерживают в термостате 45 минут,затем в каждую пробирку добавляют опытную дозу токсина и вновь оставляют в термостате на 45 минут. После этого из каждой пробирки вводят смесь (сыворотки — анатоксина —токсина) 2—4 мышам и наблюдают за состоянием животных в течение 4 суток. Если весь анатоксин, добавленный к сыворотке, связался ею, то добавление токсина и последующее
заражение мышей ведет к их гибели. При недостаточной дозе анатоксина для связывания всей сыворотки, добавленный токсин нейтрализуется сывороткой, и мыши остаются живыми. Для расчета ЕС в 1 мл определяемого анатоксина берется то разведение анатоксина, при котором происходит гибель 50% белых мышей на 4-е сутки. Это количество анатоксина содержит дозу, связывающую 0,1 ME сыворотки. Анатоксины применяются для профилактики и реже для лечения токсинемических инфекций (дифтерия, газовая ган-
грена, ботулизм, столбняк) и некоторых заболеваний, вызванных стафилококками.
94. Антимикробные сыворотки (иммуноглобулины). Получение, применение.
Антибактериальные сыворотки получают гипериммуннзацией лошадей соответствующими убитыми бактериями или антигенами и содержат антитела с агглютинирующими, литическими и опсонизирующими свойствами. Они не нашли широкого применения в силу их малой эффективности. Антибактериальные сыворотки относятся к нетитруемым препаратам, так как общепринятой единицы измерения их лечебной силы нe существует. Поэтому антибактериальные лечебные сыворотки дозируются в объемных единицах, непосредственно у постели больного, исходя из степени тяжести заболевания.для очистки и концентрации антибактериальных сывороток и некоторых антивирусных используют метод, основанный
на разделении белковых фракций нативных сывороток и выделении активных иммуноглобулинов этиловым спиртом при низкой температуре (метод водно-спиртового осаждения на холоду).Иммуноглобулины(гомологичные), получаемые из крови человека, готовят двух видов — противокоревой (или нормальный) и иммуноглобулины направленного действия. Преимущество этих иммуноглобулинов перед гетерогенными в том, что они практически нереактогенны и циркулируют в организме болеее продолжительное время, в течение 30—40 дней.Извлекают иммуноглобулины из сыворотки крови человека путем фракционирования (по методу Кона) этиловым спиртом при температуре ниже нуля.Противокоревой (или нормальный) иммуноглобулин получают из донорской, плацентарной или абортной крови. Содержит антитела против вируса кори, а также против вирусов гриппа, гепатита, полиомиелита, возбудителей коклюша и не-
которых других вирусных и бактериальных инфекций. Препарат применяют для профилактики кори, инфекционного гепатита, коклюша, полиомиелита, менингококковой инфекции и др.для профилактики кори иммуноглобулины вводят всем детям старше 3 месяцев, бывших в контакте с больным и не привитым коревой вакциной. Иммуноглобулины вводят с профилактической целью всем детям до 6 лет, контактировавшим с больным коклюшем и не привитым против этой инфекции. Профилактика гепатита А иммуноглобулином проводятся
в предэпидемичсский период и в эпидемических очагах. Препарат в некоторых случаях оказывает защитное действие или чаще смягчает клиническое течение болезни. Очень важно правильное соблюдение дозировки иммуноглобулина (0,02 мл на 1 кг веса). Продолжительность профилактического действия препарата 3—6 месяцев. Иммуноглобулины направленного действия готовят из сыворотки крови людей-добровольцев, подвергшихся специальной иммунизации против определенной инфекции. Такие препараты содержат повышенные концентрации специфических антител и используются для лечебных целей. В настоящее время получают иммуноглобулины направленного действия против гриппа, бешенства, оспы, клещевого энцефалита, столбняка и стафилококковых инфекций.
95. Антитоксические сыворотки. Получение, очистка, титрование, применение.
Антитоксические сыворотки получают иммунизацией лошадей возрастающими дозами анатоксинов, а затем и соответствующими токсинами. Сыворотки подвергают очистке и концентрации методом «Диаферм-3»,контролю на безвредность, апирогенность, затем титруют т. е. определяют содержание антитоксинов в 1 мл препарата. Специфическая активность сывороток или количество антител измеряется с помощью специальных методов, основанных на способности сывороток in vitro и in vivo нейтрализовать соответствующие токсины и
выражается в международных антитоксических единицах (ME), принятых ВОЗ. За 1 ME принимается
то минимальное количество сыворотки, которое способно нейтрализовать определенную дозу токсина, выражающуюся в стандартных единицах, обозначаемых как смертельные, некротические или реактивные дозы в зависимости от вида токсина и способа титрования.Титрование антитоксических сывороток может проводиться тремя методами — методами Эрлиха, Рёмера, Района.Титрование сывороток по методу Района
осуществляется с помощью реакции флоккуляции по известному анатоксину или токсину, одну Lf (Limes flocculationis —порог флоккуляции) которых нейтрализует одна единица дифтерийного антитоксина. Первичная или инициальная реакция флоккуляции наступает при соответствии количества антигенных единиц анатоксина количеству антитоксинов в исследуемой сыворотке. Исходя из результатов первичной реакции флоккуляции и ведется расчет антитоксических единиц в 1 мл испытуемой сыворотки. Однако метод Рамона является
только ориентировочным. Метод Эрлиха. Перед титрованием сывороток по методу Эрлиха проводят определение условной смертельной (опытной) дозы токсина Lt (Limes tod). Lt определяется с помощью стандартной антитоксической сыворотки, к определенному количеству которой добавляют различные объемы
по методу Рёмера проводится также в два этапа, но является более экономичным, т. к. опыт проводится на одном животном. Предварительно определяется опытная некротическая доза токсина — Ln (limes necrosis) введением внутрикожно морской свинке различного количества токсина со стандартной сывороткой. За некротическую дозу токсина принимается то его наименьшее количество, которое при внутрикожном
введении морской свинке в смеси с 1/50 ME стандартной противодифтериГ’ной сыворотки вызывает на месте введения некроз на 4—5-й день. Затем различные объемы испытуемой сыворотки в смеси с оттитрованной некротической дозой токсина вводятся внутрикожно морской свинке и по результатам проводится расчет титра сыворотки. По методу Рёмера титруется противодифтерийная сыворотка.
Что такое анатоксины их получение и применение
В подобных препаратах Аг служат молекулы метаболитов патогенных микроорганизмов. Наиболее часто в этом качестве выступают молекулы бактериальных экзотоксинов. Анатоксины используют для активной иммунопрофилактики токсинемических инфекций (дифтерии, столбняка, ботулизма, газовой гангрены, стафилококковых инфекций и др.).
Цель применения анатоксинов — индукция иммунных реакций, направленных на нейтрализацию токсинов; в результате иммунизации синтезируются нейтрализующие AT (антитоксины). Обычный источник токсинов — промышленно культивируемые естественные штаммы-продуценты (например, возбудители дифтерии, ботулизма, столбняка). Полученные токсины инактивируют термической обработкой либо формалином, в результате чего образуются анатоксины (токсоиды), лишённые токсических свойств, но сохранившие иммуногенность.
Анатоксины очищают, концентрируют и для усиления иммуно-генных свойств адсорбируют на адъюванте (обычно, гидрооксид алюминия). Адсорбция анатоксинов значительно повышает их иммуногенную активность. С одной стороны, образуется депо препарата в месте его введения с постепенным поступлением в кровоток, с другой — действие адъюванта стимулирует развитие иммунного ответа, в том числе и в регионарных лимфатических узлах. Анатоксины выпускают в форме моно- (дифтерийный, столбнячный, стафилококковый) и ассоциированных (дифтерийно-столбнячный, ботулинический трианатоксин) препаратов.
Конъюгированные вакцины
В некоторых случаях для иммунизации применяют конъюгированные вакцины, представляющие собой комплексы бактериальных полисахаридов и токсинов. Подобные комбинации значительно усиливают иммуногенность компонентов вакцин, особенно полисахаридной фракции (например, сочетание Аг Haemophilus influenzae и дифтерийного анатоксина). В этой ситуации последний играет роль носителя, и в ответ на введение Аг полисахаридов формируется пул длительно циркулирующих клеток памяти. Предпринимаются попытки создать смешанные бесклеточные вакцины, включающие анатоксины и некоторые другие факторы патогенное™, например адгезины. В настоящее время такие вакцины проходят клинические испытания для профилактики коклюша.
Анатоксины, их получение, свойства. Использование анатоксинов для профилактики инфекционных заболеваний.
Анатоксины
Эти препараты представляют собой бактериальные токсины, обезвреженные воздействием формалина при повышенной температуре с последующей очисткой и концентрацией. Анатоксины сорбируют на различных минеральных адсорбентах, например на гидроокиси алюминия. Адсорбция значительно повышает иммуногенную активность анатоксинов. Это связано как с созданием «депо» препарата в месте введения, так и с адъювантным действием сорбента, вызывающего местное воспаление, усиление плазмоцитарной реакции в регионарных лимфатических узлах. Анатоксины обеспечивают развитие стойкой иммунологической памяти, этим объясняется возможность применения анатоксинов для экстренной активной профилактики дифтерии и столбняка.
препарат из токсина, не имеющий выраженных токсических свойств, но при этом способный индуцировать выработку антител к исходному токсину. Обычно инактивация токсина производится путём длительного выдерживания в тёплом разбавленном растворе формалина. Анатоксины используются для профилактики инфекционных заболеваний, в основе патогенеза которых лежит интоксикация: дифтерии, столбняка, отравлений токсином стафилококка, холероген-анатоксин и т. п
ТРЕТИЙ РАЗДЕЛ.
Стафилококки.
Род Staphylococcus представлен тремя видами: Staphylococcus aureus; Staphylococcus epidermidis; Staphylococcus saprophyticus.
Стафилококки обычно встречаются в виде скоплений, напоминающих виноградную гроздь. Отдельные кокки, примерно 1 мкм в диаметре, имеют тенденцию объединяться в скопления, поскольку их деление происходит в трех взаимно перпендикулярных плоскостях и дочерние клетки сохраняют своеобразное пространственное групповое взаиморасположение. При специальных условиях они могут располагаться поодиночке, попарно, или в виде коротких цепочек.
Морфология и культуральные свойства
· активно растут практически на всех искусственных средах
· обычно образуя непрозрачные, гладкие, блестящие колонии.
· при культивировании на кровяном агаре в аэробных условиях образуют пигменты ‑ от золотистого до лимонно желтого и белого цвета. золотистый пигмент дал название одному из видов стафилококка ‑ staphylococcus aureus.
ОТЛИЧИЕ ПАТОГЕННЫХ КОЛОНИЙ ОТ НЕПАТОГЕННЫХ (на элективной среде – желточно-солевой агар)
— у патогенной колонии вокруг наблюдается радужная оболочка (у патогенной радужки нет)
— патогенная выделяет коагулазу – обнаруживается в крови по сгусткам
— только патогенная разрушает моннит в анаэробных условиях
· очень активны – продуцируют каталазу
· выделяют аммиак при росте в аргениновом бульоне
· восстанавливают нитраты до нитритов или азота
· активно гидролизуют белки, жиры и твины, и многие углеводы в аэробных условиях
· ФЕРМЕНТАЦИЯ ГЛЮКОЗЫ В АНАЭРОБНЫХ УСЛОВИЯХ С ОБРАЗОВАНИЕМ МОЛОЧНОЙ КИСЛОТЫ
· Микрокапсула – способствует адгезии и распространению по тканям
· компоненты клеточной стенки – стимулируют развитие воспалительных реакций – усиливают синтез ИЛ-1 макрофагами. Тейхоевые кислоты активируют свертывающую систему, облегчают адгезию к эпителиям. Активация комплемента – местные проявления – феномен Артюса, анафилаксия
· ферменты агрессии – каталаза, бета-лактамаза, липазы, коагулаза, гемолизины
· токсины – эксфолиатины А и В (с-м ошпаренной кожи), токсин синдрома токсического шока, энтеротоксины (пищевые интоксикации)
Пептидогликан и тейхоевые кислоты клеточной стенки
· Вызывают оппортунистическую инфекцию (у больных со сниженным иммунитетом) проявляющуюся в виде гнойно-воспалительных процессов различной локализации и степени тяжести
· Болезни кожи и ПЖК – абсцессы и фурункулы, гидроадениты, панариций
· Болезни органов дыхания – ангина, плеврит, пневмония
· Б-ни органов пищеварения – стоматит, перитонит, парапроктит, энетерит
· Б-ни костно-мышечной системы – артриты, остеомиелиты
· Б-ни с-мы кровообращения – эндокардит, перикардит, флебит
· Б-ни мочеполовых органов – пиелит, цистит, уретрит
· устойчивее других бактерий к действию жара, света, высушивания, экстремальных температур и химических агентов. Они выдерживают 60°С в течение часа, а отдельные штаммы даже 80°С в течение 30 минут, хотя большинство вегетативных форм бактерий погибают при воздействии 60°С в течение 30 минут.
· Другой особенностью стафилококков является их устойчивость в солевой среде (не погибают при концентрации NaCl до 15 %). В связи с этим способны сохраняться в консервированных продуктах (пресервах).
· устойчивы к действию фенола и большинству других дезинфектантов, чувствительны к основным красителям. Имеют тенденцию к формированию резистентности к сульфаниламидам и антибиотикам. Около 80 % штаммов Staphylococcus aureus резистентны к пенициллину.
Постинфекционный – клеточно-гуморальный, нестойкий и ненапряженный
Высев на ЖСА и определение патогенности по 3м признакам
Фаготипирование (в целях определения конкретного штамма и в эпидемиологических целях)
Лечение: по показаниям (от антибиотикотерапии шир.спектра действия до хир.вмешательства и санации очага)
Профилактика: ликвидация источника инфекции. Осмотр медперсонала, разделение гнойной и чистой хирургии. Соблюдение санитарных норм асептики и антисептики.
Дата добавления: 2019-07-15 ; просмотров: 446 ; Мы поможем в написании вашей работы!
Анатоксины
Смотреть что такое «Анатоксины» в других словарях:
Анатоксины — представляют собой бактериальные экзотоксины, обезвреженные длительным воздействием формалина при повышенной температуре. Анатоксины обладают относительно низкой реактогенностью. Источник: ПОРЯДОК УНИЧТОЖЕНИЯ НЕПРИГОДНЫХ К ИСПОЛЬЗОВАНИЮ ВАКЦИН… … Официальная терминология
анатоксины — Бактериальные экзотоксины exotoxins, инактивированные формалином (0,3 0,5 % ный раствор) или теплом (38 40 °С), но сохранившие антигенные свойства. [Арефьев В.А., Лисовенко Л.А. Англо русский толковый словарь генетических терминов 1995 407с.] … Справочник технического переводчика
АНАТОКСИНЫ — (Anatoxinum, от греч. Ana обратно и toxikón яд), безвредные производные токсина, сохранившие его антигенные и иммуногенные свойства. А. получают, обезвреживая токсин раствором формальдегида при t 3740°C в нейтральной или… … Ветеринарный энциклопедический словарь
Вакцина — (лат. vaccinum коровий, от vacca корова) препарат, получаемый из микроорганизмов (бактерий, риккетсий, вирусов) или продуктов их жизнедеятельности и используемый для активной иммунизации (См. Иммунизация) людей и животных с… … Большая советская энциклопедия
Вакци́ны — (лат. vaccinus коровий) препараты, получаемые из микроорганизмов или продуктов их жизнедеятельности; применяются для активной иммунизации людей и животных с профилактической и лечебной целями. Вакцины состоят из действующего начала специфического … Медицинская энциклопедия
Токсины — (от греческого toxikоn яд) вещества бактериального, растительного или животного происхождения, способные угнетать физиологические функции, что приводит к заболеванию или гибели животных и человека. По химической природе все Т. белки или… … Большая советская энциклопедия
ВАКЦИНАЦИЯ И ИММУНИЗАЦИЯ — процессы, обеспечивающие активную или пассивную биологическую устойчивость организма к определенным инфекционным заболеваниям. Искусственная активная иммунизация стимуляция иммунной системы путем введения вакцины или анатоксина (обезвреженного… … Энциклопедия Кольера
Биологические препараты — Биологические препараты группа медицинских продуктов биологического происхождения, в том числе вакцины, препараты крови, аллергены, соматические клетки, ткани, рекомбинантные белки. В состав биологических препаратов могут входить сахара,… … Википедия
ИНФЕКЦИЯ РАНЕВАЯ АНАЭРОБНАЯ — мед. Анаэробная раневая инфекция инфекция с быстро прогрессирующим некрозом и распадом мягких тканей, обычно сопровождается образованием газов и тяжёлой интоксикацией; наиболее грозное и опасное осложнение ран любого генеза. Этиология Возбудители … Справочник по болезням
Анатоксин
СТАЙЛАБ предлагает тест-системы для рецепторного анализа анатоксина-а в пробах воды, а также стандартные растворы и сухие стандарты анатоксина-а и гомоанатоксина-а.
Анатоксин-а является нейротоксином. Он действует подобно никотину и некоторым другим ядам: связывается с Н-холинорецепторами (никотиновыми рецепторами к ацетилхолину) и активирует нервную систему. Но сродство анатоксина-а к этим рецепторам приблизительно в 20 раз выше, чем у никотина, что приводит к более тяжелым отравлениям.
Не следует путать анатоксин-а с анатоксином-а(С) (anatoxin-a(S). Эти вещества различаются как химически, так и по механизму действия: анатоксин-а(С) является природным органофосфатом и необратимо блокирует ацетилхолинэстеразу.
Анатоксин-а начинает действовать уже через несколько минут после попадания в организм. Для начала отравления характерны неуверенные движения и мышечные подергивания, которые сменяются затрудненным дыханием и судорогами. Животные умирают в период от нескольких минут до нескольких часов из-за остановки дыхания. Подобным же образом действует гомоанатоксин-а.
Согласно исследованиям, анатоксин-а не проявляет хронической токсичности. Это означает, что даже длительное употребление этого яда в дозах ниже минимальной токсической не приведет к негативным последствиям. Однако острая токсичность анатоксина-а весьма высока: ЛД50 для мышей составляет, по разным источникам, 250 – 375 мкг/кг массы тела, что ненамного ниже токсичности стрихнина. Кроме того, анатоксин-а проявил репродуктивную токсичность в исследовании на хомячках: практически всегда он вызывал остановку роста плода и в некоторых случаях – такие патологии, как гидроцефалия. Впрочем, в аналогичном исследовании на мышах он не проявил таких эффектов. О репродуктивной токсичности этого яда для людей данных нет.
В природных условиях, в том числе, в воде, анатоксин-а быстро фотодеградирует. Время его полураспада составляет менее суток. Это означает, что опасность отравления им присутствует только во время «цветения» водоема, при условии, что организмы, вызвавшие его, вырабатывают его. Однако в таких условиях концентрации анатоксина-а в воде могут достигать очень высоких значений, представляющих опасность для позвоночных животных, включая человека и потенциально способных нанести вред на уровне экосистем. К примеру, массовая гибель фламинго в 2001-2002 годах на озерах Богория и Накуру в Кении была вызвана именно анатоксином-а. Такие свойства этого яда обуславливают необходимость мониторинга цианобактерий в водоемах и анализа фикотоксинов в воде.
В первых исследованиях анатоксина-а для определения его ЛД50 и ЛД100, а также экотоксичности использовались биологические методы. Исследования проводили на мышах, а также на ракообразных и их личинках. Для обнаружения анатоксина-а эти методы непригодны, поскольку не являются селективными, обладают недостаточной чувствительностью при высоких концентрациях токсина и требуют больших затрат биоматериала. К современным методам анализа анатоксина-а относится хроматография – ВЭЖХ с УФ- или флуоресцентным детектором, ВЭЖХ-МС или ГХ-МС. Основной недостаток этих методов применительно к обнаружению анатоксина-а заключается в быстром распаде этого вещества: поскольку анализ невозможно провести на месте сбора проб, не всегда удается получить корректные данные о содержании в них токсина. Тонкослойная хроматография позволяет определять содержание анатоксина-а в клетках цианобактерий и обладает высокой чувствительностью.
Альтернативные методы анализа анатоксина-а основаны на сродстве этого вещества и гомоанатоксина-а к никотиновым рецепторам. Они называются рецепторными методами анализа и позволяют быстро и с высокой точностью определять концентрацию анатоксина-а в пробах. Тест-система Anatoxin-a RBA Kit создана на основе этого эффекта и позволяет определять содержание анатоксина-а в пределах от 10 мкг/л до 500 мкг/л. Кроме того, с помощью тест-системы Anatoxin-a ELISA Kit возможно определять содержание анатоксина-а методом иммуноферментного анализа (ИФА), что значительно сокращает временные затраты.